体内转染常见问题

体内转染常见问题

1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材?

①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。

②转染试剂和动物。

③进行注射的器材。

2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗?

可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要求核酸高纯度。因为纯度直接影响转染效果,在同样剂量的情况下,高纯、高质量的核酸可比普通纯度的转染效果高几倍,而且不容易造成动物炎症反应和死亡。如果用通常质量的核酸用于体内转染,建议在保持转染试剂和核酸比例情况下,同步加大用量。

3.转染试剂和核酸需要使用多少?

转染RNA和DNA的剂量有差别,一般来说,RNA尾静脉注射成年小鼠,每只每次,需要100ug核酸和50ul转染试剂。局部注射的剂量会小很多,大约总注射量的1/8为转染试剂。

4.采用哪种注射途径比较好?

根据课题研究的不同,可以采用尾静脉注射,局部注射等方式。

5.注射后,试剂是如何在体内分布的,有特异性吗?

采用尾静脉注射,通过血液循环系统分布,没有特异性;通过局部注射,一般分布在局部。

6.试剂作用原理是什么?对动物有什么影响?

EntransterTM体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。

7.转染效果如何检测?

一般根据课题研究要求进行,如果单纯检测转染效率,推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究,采用组织学和生理学,以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性,通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法,由于体内取出的组织材料背景高,检测较为困难。

EntransterTM什么时候推出来的?转染效果怎样?有哪些实验室应用?

EntransterTM是2010年由英格恩公司研发推出的,虽然推出时间不长,但已有很多实验室应用,并陆续有很多高质量文献发表。转染效果非常好,尤其对小片断核酸(如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor)的转染效果很好。目前应用的实验室,有美国、欧洲以及韩国、中国等许多国家的一流实验室。

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