本指南按核酸类型、细胞类型和实验场景，帮助你选择合适的英格恩转染试剂。各产品的详细用量和操作步骤见对应产品页。
一、快速选型表
| 实验需求 | 推荐产品 | 选用要点 |
|---|---|---|
| HEK293 全系转染、病毒包装、重组蛋白生产 | Entranster™-H | 针对 HEK293、293T、293T-suspension、293F、293-6E、Expi293 等优化；支持贴壁和大规模悬浮转染，覆盖从微孔板到数十升悬浮放大；可用于慢病毒、AAV、腺病毒包装与重组蛋白生产 |
| 质粒 DNA、长片段（>1kb）mRNA | Entranster™-H4000 | 正在用脂质体试剂的，可直接替换，用法用量不变；转染时细胞密度 60–80% |
| siRNA、miRNA mimic/inhibitor（1kb 以下 RNA） | Entranster™-R4000 | 转染时汇合度 30–50%；在含血清、不含双抗的完全培养基中转染，4–6 小时后换液；可用阳性对照 siRNA 判断体系是否有效（应见 ≥70% 敲低） |
| 神经元、原代细胞等难转染细胞（电穿孔） | Entranster™-E | 电穿孔专用缓冲液，需配合电转仪使用（Lonza Amaxa®、Bio-Rad® Gene Pulser、BTX® 等）；可导入 DNA、siRNA |
| 动物体内表达质粒 DNA | DNA 体内转染 Entranster™-in vivo | DNA:试剂 = 1:2 混合后注射；注射后一般 12–48 小时可检测目的基因表达 |
| 动物体内递送 siRNA、miRNA 等小 RNA | RNA 体内转染 Entranster™-in vivo | RNA:试剂 = 2:1；尾静脉推荐剂量 2.5–5 mg/kg（起始 2.5 mg/kg） |
| 病毒载体转导效率低 | Envirus™ 病毒感染增强系列 | 按病毒类型选择：慢病毒 LV、腺病毒 AV、腺相关病毒 AAV、逆转录病毒 RV、动物体内 in vivo、其他病毒及革兰式阴性菌用通用型 |
二、HEK293 转染、病毒包装与重组蛋白生产
做 HEK293 系细胞的转染、病毒包装（慢病毒、AAV、腺病毒）或重组蛋白生产，可选用 Entranster™-H。它针对 HEK293、HEK293T、HEK293T-suspension、HEK293F、HEK293-6E、Expi293 等细胞优化，贴壁和悬浮培养都能用，可从微孔板一直放大到数十升悬浮培养。
- 贴壁转染：转染时汇合度 60–80%，建议使用 20 代以内的细胞；在含血清的完全培养基中转染有助于提升效率。
- 大规模悬浮转染：转染当日细胞密度 1.8–2.2×10⁶ cells/ml、存活率 ≥95%；DNA 按每 ml 培养 1μg，试剂按 0.75–1.0μl/μg DNA，复合物体积为培养体积的 20%；适合数十毫升到数十升级别的瞬时表达。
- 慢病毒包装：三质粒按转移质粒:psPAX2:pMD2.G = 4:3:1（质量比），转染后 48h 与 72h 各收一次上清合并。
- AAV 包装：三质粒按 pAAV-ITR-GOI:pAAV-RC:pHelper = 1:1:2，72–96h 细胞与上清同时收获。
- 重组蛋白与抗体生产：96–144h（活率降至 60–70% 时）收获上清；可配合 VPA/NaB 增效、补料和降温（37℃→32℃）提高产量。
- 质粒要求：用于病毒包装和大规模悬浮转染时必须使用无内毒素质粒（内毒素 <0.1 EU/μg）。
三、动物体内转染
需要在小鼠、大鼠等动物体内直接递送核酸、又不想做病毒包装时，可选用 Entranster™-in vivo 体内转染试剂，转 DNA 和转 RNA 各有一款。可用于基因治疗、RNA 干扰和蛋白功能的动物体内研究，对动物无明显炎性反应。
- 体内表达质粒 DNA：选 DNA 体内转染 Entranster™-in vivo。DNA(μg):试剂(μl) = 1:2；小鼠尾静脉起始剂量 0.625 mg/kg（20g 小鼠约 12.5μg）。
- 体内递送 siRNA、miRNA 等 RNA：选 RNA 体内转染 Entranster™-in vivo。RNA(μg):试剂(μl) = 2:1；尾静脉推荐 2.5–5 mg/kg（起始 2.5 mg/kg，成年小鼠约 50–150μg）。
- 给药途径：可尾静脉全身给药，也可脑室、腹膜、睾丸、皮下肿瘤、肺/气管灌注等局部注射；针对靶器官局部注射用量更少，效果通常更明显。
- 操作：核酸用无内毒素纯水溶解，核酸和试剂分别用葡萄糖溶液稀释后混合，室温静置 15 分钟即可注射，现配现用。
- 检测时间：注射后 12–48 小时检测效果较好，建议先用 qRT-PCR 确认；需要维持长期效果时，可每 2–3 天注射一次（也可延长到每 7 天一次）。
四、难转染细胞的电穿孔
神经元、原代细胞、免疫细胞等用常规转染试剂效果不理想时，可以改用电穿孔。Entranster™-E 是电穿孔专用缓冲液，用于把 DNA、siRNA 等核酸导入难转染细胞，需要配合电转仪使用。
- 兼容仪器：Lonza Amaxa® Nucleofector®、Bio-Rad® Gene Pulser、Harvard-BTX® 等，指数衰减脉冲和方波脉冲都适用。
- 已在用 Lonza 4D 系统：沿用原厂推荐程序，把原厂电转液（P1、P2 或 P3）换成同体积的 Entranster™-E 即可，不需要重新计算电压、电容；效果不理想时再按细胞类型微调程序。
- 有推荐参数的细胞：原代大鼠皮层神经元、原代人角质形成细胞、原代 MEFs、A549、CHO-K1、COS-7、HEK293/293T、HeLa、HepG2、HL-60、Jurkat、K562、NIH-3T3、RAW 264.7、THP-1 等。
- 电转条件：悬浮细胞约 10×10⁶ 个/ml，贴壁细胞 1–5×10⁶ 个/ml；DNA 终浓度 5–50μg/ml，siRNA 250–750 nM；加入的核酸体积不超过总体系的 10%。
- 效率与存活：电穿孔有物理损伤，经验上转染后死亡率在 50% 左右时往往能获得最佳效率。
- 储存：4℃ 储存，有效期 6 个月，建议一次用完。
五、小核酸细胞转染选择
在培养细胞中转染 siRNA、miRNA mimic/inhibitor 等 1kb 以下的小核酸，选用 Entranster™-R4000。R4000 细胞毒性较低，适用于各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞和昆虫细胞。1kb 以上的核酸请改用 Entranster™-H4000；动物体内递送小 RNA 见第三节，难转染细胞的电穿孔见第四节。
| 小核酸类型 | 用量要点 |
|---|---|
| siRNA、miRNA mimic | 24 孔板每孔 0.333μg（25pmol）+ R4000 0.5μl，按培养容器表面积换算；miRNA mimic 用量与 siRNA 相同 |
| miRNA inhibitor | 单链反义寡核苷酸，通常需要更高的工作浓度，可至 siRNA 的 2–4 倍 |
转染条件
- 细胞密度：贴壁细胞转染时汇合度 30–50%；悬浮细胞取对数生长期细胞，按常规接种量的 1/3 进行转染。
- 培养基：在含血清、不含双抗的完全培养基中转染，含血清有助于提升效率；转染 4–6 小时后换回含双抗的完全培养基。需要用 Trizol 提取 RNA 时，转染后 6 小时换液。
- 检测时间：转染后 24–72 小时在 mRNA 水平、24–96 小时在蛋白水平检测。
- 反向转染：高通量 siRNA 筛选、贴壁较慢的细胞，或想省去提前一天铺板时，可先在孔内形成复合物再加入细胞；不适用于胰酶消化后存活率低的极脆弱细胞。
- 小体积用量：96 孔、48 孔中试剂用量很小（96 孔低至 0.1μl），建议按 8–12 倍量预混试剂稀释液，再按孔数分装。
结果可靠的几个要点
- 设好对照：阴性对照用非靶向 siRNA；阳性对照用已验证高效的 siRNA（常靶向 GAPDH、PPIB、Lamin A/C），应见 ≥70% 敲低，用来确认转染体系有效；mock 对照只加试剂、不加 siRNA，用来评估试剂本身对细胞的影响。
- 排除脱靶：用 2–3 条独立的 siRNA 靶向同一基因，确认表型一致；siRNA 浓度过高会增加毒性和脱靶。
- 先做优化：在 24 孔板中按 siRNA 50/75/100 nM × 试剂:siRNA 0.5:1/1:1/1.5:1（μl:μg）做 9 孔矩阵，选细胞活率 ≥85% 且敲低最好的组合，再按表面积放大。
- 用量换算：21nt 双链 siRNA，1 OD = 3.0 nmol = 40μg。
六、质粒 DNA 和长片段 mRNA 转染
常规细胞系用 Entranster™-H4000。HEK293 系细胞的病毒包装和重组蛋白生产选 Entranster™-H。常规方法难以转染的细胞可用 Entranster™-E 配合电转仪进行电穿孔。质粒应无内毒素且纯度高（内毒素 <0.1 EU/μg，OD260/280 = 1.8–2.0，OD260/230 > 2.0）。
长片段（>1kb）mRNA 同样用 Entranster™-H4000：复合物孵育时间缩短到 5–10 分钟，全程去除 RNA 酶，转染后 6–48 小时检测。建议检查 5′ 帽和 3′ poly(A)（长度 ≥120nt）是否完整；使用 m1Ψ 修饰的 mRNA 可减少先天免疫反应、延长表达；>3kb 的 mRNA 效率偏低时，可将试剂量上调到 DNA 推荐量的 1.5 倍，或采用离心法。
七、按细胞类型选择
- HEK293 全系（含悬浮型）：选 Entranster™-H，覆盖从微孔板到数十升悬浮放大。
- 其他常见贴壁细胞系（HeLa、A549、MCF-7、HepG2 等）：转质粒 DNA、长 mRNA 用 H4000，转 siRNA、miRNA 用 R4000。
- 原代细胞、悬浮细胞：转 siRNA、miRNA 可直接用 R4000（适用于原代细胞、悬浮细胞和昆虫细胞）；转质粒时可用 H4000，并采用”离心法”增加复合物与细胞的接触。
- 神经元、免疫细胞等难转染细胞：用 Entranster™-E 电穿孔，详见第四节。
八、siRNA 与质粒共转染
同一个实验既要敲低（siRNA）又要过表达（质粒）时，两者同时转染会相互干扰，建议分步转染：先用 R4000 转染 siRNA，24 小时后细胞状态良好（无需换液）再用 H4000 转染质粒 DNA。做 Rescue 实验时，过表达质粒需带同义突变以避开 siRNA 识别区，否则质粒同样会被敲低。
九、常见选型问题
HEK293 转染、慢病毒/AAV 包装和重组蛋白生产用哪款？
用 293 全系转染试剂 Entranster™-H，针对 HEK293、293T、293F、Expi293 等优化，支持贴壁转染和数十毫升到数十升的大规模悬浮转染；慢病毒三质粒按转移质粒:psPAX2:pMD2.G = 4:3:1（质量比），AAV 三质粒按 pAAV-ITR-GOI:pAAV-RC:pHelper = 1:1:2。
转染质粒 DNA 用哪款试剂？
常规细胞系用 Entranster™-H4000；HEK293 系细胞的病毒包装和重组蛋白生产选 Entranster™-H；常规方法难以转染的细胞可用电穿孔专用缓冲液 Entranster™-E。
转染 mRNA 用哪款？
长片段（>1kb）mRNA 用 Entranster™-H4000，复合物孵育时间缩短到 5–10 分钟，全程去除 RNA 酶，转染后 6–48 小时检测。
siRNA、miRNA 转染用哪款？
用 Entranster™-R4000，适用于 siRNA、miRNA mimic/inhibitor 等 1kb 以下的 RNA；转染时细胞汇合度 30–50%，在含血清、不含双抗的完全培养基中转染，可用阳性对照 siRNA 判断体系是否有效（应见 70% 以上敲低）。
siRNA 和质粒能同时转染吗？
两者同时转染会相互干扰，建议分步进行：先用 Entranster™-R4000 转染 siRNA，24 小时后细胞状态良好（无需换液）再用 Entranster™-H4000 转染质粒 DNA。
神经元、原代细胞等难转染细胞怎么转染？
可用电穿孔专用缓冲液 Entranster™-E 配合电转仪（Lonza Amaxa、Bio-Rad Gene Pulser、BTX 等）；使用 Lonza 4D 系统时沿用原厂推荐程序，只需把原厂电转液换成同体积的 Entranster™-E，效果不理想时再按细胞类型微调程序。也可用 Entranster™-H4000 配合离心法提高复合物与细胞的接触。
动物体内转染选哪款？
体内表达质粒 DNA 用 DNA 体内转染 Entranster™-in vivo（DNA:试剂 = 1:2）；体内递送 siRNA、miRNA 等小 RNA 用 RNA 体内转染 Entranster™-in vivo（RNA:试剂 = 2:1，尾静脉推荐 2.5–5 mg/kg）；注射后一般 12–48 小时可检测效果。
病毒载体感染效率低怎么办？
可在感染时使用 Envirus™ 病毒感染增强试剂，按病毒类型选择：慢病毒用 Envirus™-LV、腺病毒用 Envirus™-AV、腺相关病毒用 Envirus™-AAV、逆转录病毒用 Envirus™-RV、动物体内感染用 Envirus™-in vivo，其他病毒或革兰式阴性菌用通用型 Envirus™。
以上产品均仅限科研用途。选型或实验中有疑问，可联系英格恩技术支持：010-60535354，sales@engreen.com.cn。英格恩（北京英格恩生物科技有限公司）自 2007 年起专注转染试剂研发与生产。
