产品介绍
EntransterTM-E是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）专门针对常规方法“难转染”细胞而开发的电穿孔转染试剂。该电转染试剂加入了独有的入核和细胞膜修复成分，使细胞膜更易于被电穿孔，并直接将DNA送入核内，同时降低由于电击造成的细胞死亡率。
有BTX和Lonza原装配套电转杯同时销售，详询销售。订购金额满1000元，免运费。
EntransterTM-E是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）专门针对常规方法“难转染”细胞而开发的电穿孔转染试剂。该电转染试剂加入了独有的入核和细胞膜修复成分，使细胞膜更易于被电穿孔，并直接将DNA送入核内，同时降低由于电击造成的细胞死亡率。
干细胞，神经细胞，原代细胞和其他方法难转染细胞的转染。
可用于瞬时转染和稳定转染。
高转染率EntransterTM-E含有独有的入核和细胞膜修复成分，可以直接将DNA送入核内，高效转染、快速表达。
低细胞死亡率细胞死亡率<40%。EntransterTM-E独特的成分能够迅速修复因电击打开的细胞膜，将电击给细胞造成的伤害减到最小。
不需要购置新仪器，常见电转仪都能用 用于Lonza电转仪，单一液体用于多种细胞，效率更好，花费减半。用于Bio-rad、BTX等电转仪，比PBS等效率提高10倍！
Trends Biotechnol. 2025 Aug 30:S0167-7799(25)00314-2.doi: 10.1016/j.tibtech.2025.07.029. Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase 基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物 (IF:14.900).
Nat Biotechnol. 2025 Apr 21.doi: 10.1038/s41587-025-02641-9. Online ahead of print. QBEmax is a sequence-permuted and internally protected base editor QBEmax是一个序列置换和内部保护的碱基编辑器 (IF:33.1).
Animals (Basel). 2025 Feb 18;15(4):590.doi: 10.3390/ani15040590. Achieving Optimal Transfection Conditions in Chicken Primordial Germ Cells Under Feeder- and Serum-Free Medium 在饲养和无血清培养基下实现鸡原始生殖细胞的最佳转染条件
Sci Rep. 2024 Jul 26;14(1):17665.doi: 10.1038/s41598-024-68169-1. Sodium Tanshinone IIA Sulfonate alleviates vascular senescence in diabetic mice by modulating the A20-NFκB-NLRP3 inflammasome-catalase pathway 通过调节A20-NFκB-NLRP3炎性体过氧化氢酶途径缓解糖尿病小鼠血管衰老 (IF:4.122).
Biol Direct. 2024 Jun 24;19(1):49.doi: 10.1186/s13062-024-00490-1. Silencing LINC00987 ameliorates adriamycin resistance of acute myeloid leukemia via miR-4458/HMGA2 axis 通过miR-4458/HMGA2轴改善急性髓系白血病的阿霉素耐药性 (IF:5.700).
Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2024 Jun 25;56(6):892-904.doi: 10.3724/abbs.2024032. FGF21 overexpression alleviates VSMC senescence in diabetic mice by modulating the SYK-NLRP3 inflammasome-PPARγ-catalase pathway FGF21过表达通过调节SYK-NLRP3炎性体PPARγ-过氧化氢酶途径缓解糖尿病小鼠VSMC衰老
Parasite . 2023:30:55. doi: 10.1051/parasite/2023060. Epub 2023 Dec 11. Comparative characterization of microRNA-71 of Echinococcus granulosus exosomes
BMC Biotechnol. 2023 Aug 16;23(1):29.doi: 10.1186/s12896-023-00799-1. Efficient delivery of a large-size Cas9-EGFP vector in porcine fetal fibroblasts using a Lonza 4D-Nucleofector system 使用Lonza 4D Nucleofector系统在猪胎儿成纤维细胞中高效递送大尺寸Cas9-EGFP载体
Vet Sci. 2023 Jan 19;10(2):75.doi: 10.3390/vetsci10020075. Transcriptome RNA Sequencing Reveals That Circular RNAs Are Abundantly Expressed in Embryonic Breast Muscle of Duck circRNA在鸭胚胎胸肌中大量表达
iScience . 2022 Apr 13;25(5):104249. doi: 10.1016/j.isci.2022.104249. eCollection 2022 May 20. L3MBTL2-mediated CGA transcriptional suppression promotes pancreatic cancer progression through modulating autophagy. (IF:6.107).
Genes (Basel). 2022 May 7;13(5):835.doi: 10.3390/genes13050835. (IF4.096) Efficient Simultaneous Introduction of Premature Stop Codons in Three Tumor Suppressor Genes in PFFs via a Cytosine Base Editor 通过胞嘧啶碱基编辑器在PFFs的三个肿瘤抑制基因中同时有效引入过早终止密码子
Oncol Lett.2021 Jul;22(1):521.doi: 10.3892/ol.2021.12782. Epub 2021 May 11. GFI-1 overexpression promotes cell proliferation and apoptosis resistance in mycosis fungoides by repressing Bax and P21
Veterinary MicrobiologyVolume 239, December 2019, 108494
Bovine herpesvirus 1 tegument protein UL41 suppresses antiviral innate immune response via directly targeting STAT1牛疱疹病毒1型被膜蛋白UL41抑制抗病毒天然免疫
J Cell Biochem . 2018 Dec;119(12):10176-10185. doi: 10.1002/jcb.27358. Epub 2018 Aug 20. Excreted-secreted antigens of Toxoplasma gondii inhibit Foxp3 via IL-2Rγ/JAK3/Stats pathway
J Cell Mol Med . 2017 Sep;21(9):1944-1953. doi:10.1111/jcmm.13115
Chinese 1 strain of Toxoplasma gondii excreted-secreted antigens negatively modulate Foxp3 via inhibition of the TGFßRII/Smad2/Smad3/Smad4 pathway
在使用 Lonza 4D 系统时，不需要根据 Entranster™-E 的电压/电容参数重新计算，而是直接沿用 Lonza 的闭合式脉冲方案。
程序代码 (Code)：直接使用 Lonza 针对特定细胞类型推荐的 4D 程序（如：EO-114, DS-150 等）。
缓冲液替换：将 Lonza 原厂 Nucleofector™ 溶液（P1, P2 或 P3）替换为同等体积的 Entranster™-E 即可。
|
细胞类型 |
推荐 4D-Nucleofector 程序代码 |
实验重点提示 |
|
原代神经元 (Rat Neuron) |
CU-133 或 EM-110 |
重点保护轴突，减少物理损伤 。 |
|
原代 MEFs |
CZ-167 |
针对致密胞膜设计的高场强脉冲。 |
|
Jurkat / THP-1 |
CL-120 |
针对免疫细胞核膜结构优化。 |
|
HEK-293T / HeLa |
DS-150 |
追求高转染效率的快速脉冲。 |
|
HUV-EC |
VE-100 |
针对内皮细胞的平衡模式。 |
1). 细胞状态与环境要求
严禁预冷：与传统系统不同，Lonza 4D 系统严禁预冷电转条或电转杯。
恢复室温：所有缓冲液（Entranster™-E）必须恢复至室温，细胞培养基预热至 37°C。
细胞汇合度：贴壁细胞应在 70-80% 汇合度 (Confluency) 时采集，确保处于指数生长期。
2). 离心与重悬参数
离心力：以 90–200 × g 室温离心 10 分钟。注意，90 × g 为手册推荐值，对于部分悬浮细胞可适当增加至 200 × g 以提高回收率。
重悬体积：100 μL 体系 (大杯)：使用 100 μL Entranster™-E 重悬。20 μL 体系 (16-well 条带)：等比例缩放，使用 20 μL 缓冲液。
3). 核酸加入量校准
DNA 载量：100 μL 体系建议加入 2-5 μg 高纯度 DNA。
体积限制：加入的核酸体积严禁超过总体系的 10%（例如 100 μL 体系中 DNA 体积应控制在 10 μL 以内），以防稀释缓冲液导致阻抗异常。
去内毒素：针对 4D 系统的高敏感性，强烈建议使用 Endo-free (无内毒素) 级别的质粒，且避免乙醇沉淀法，以防残留盐离子引发电弧。
若使用原厂推荐程序配合 Entranster™-E 效果不佳，请按以下生物学逻辑进行二轮微调：
若细胞死亡率异常（高于 60%）：保持程序不变，检查质粒纯度是否达标（OD 1.8-2.0）。尝试选择 Lonza 库中针对同类细胞“高存活率(High Viability)”类别的代码（例如从 DS 系列切换至 DN 或核心保护模式代码）。
若转染效率极低（低于10%）：确认细胞是否处于 70-80% 汇合度的指数生长期。尝试切换至“高效率(High Efficiency)”类别的代码（例如提升脉冲场强级别的程序）。
|
问题分类 |
可能原因与解决方法 |
|
细胞质量管理 |
支原体污染可改变细胞形态并降低效率。传代次数过多或过少均会影响细胞对脉冲的敏感度。 |
|
电弧诊断特征 |
电转瞬间听到明显”啪”声；仪器报错或显示异常放电提示；指数衰减模式下实测时间常数（τ）远低于预期值（例如预期 τ ≈ 20-30 ms，实测仅 1-5 ms）；电转杯内出现可见气泡、焦痕或金属电极表面变色。 |
|
缓冲液离子浓度过高 |
细胞重悬前未彻底去除培养基残留（含高浓度 NaCl 和血清），导致体系电导率过高。解决方法：离心后用无钙镁 PBS 洗涤细胞一次，再用 Entranster™-E 重悬；确保离心后完全吸除上清，不留残液。 |
|
核酸溶液引入盐离子 |
DNA/RNA 溶解于 TE 缓冲液或含盐洗脱液中，加入后提升体系电导率。解决方法：核酸应溶解于无菌超纯水或低 TE（0.1×TE）中；加入的核酸体积严格控制在总体系的 10% 以内。 |
|
乙醇沉淀残留 |
质粒纯化后乙醇沉淀步骤中残留的醋酸钠或醋酸铵未充分去除。解决方法：改用柱纯化试剂盒（如 Qiagen EndoFree）替代乙醇沉淀法；若必须使用乙醇沉淀，需用 70% 乙醇充分洗涤两次并彻底风干 |
|
电转杯问题 |
电转杯受潮或电极间有冷凝水；杯子被重复使用导致电极腐蚀。解决方法：使用前确认电转杯干燥；严禁重复使用一次性电转杯；从密封包装取出后尽快使用。 |
|
气泡引发电弧 |
混合核酸与细胞悬液时引入气泡，气泡处介电强度低，成为放电通道。解决方法：混合时用移液器轻柔吹吸，避免产生气泡；转移至电转杯后轻弹杯壁使气泡上浮，或短暂低速离心（2-3秒桌面离心）排除气泡。 |
|
体积过少 |
实际加入体积不足导致电极间液面未完全覆盖电极，形成液面-空气界面处的局部放电。解决方法：0.2 cm 杯体积不低于 80 μl；0.4 cm 杯体积不低于 200 μl。 |
|
电压/电容设置不当 |
设定电压超出细胞类型耐受范围，或电容偏高导致能量过大。解决方法：首次实验从推荐参数的低值端起步；以 10-20 V 梯度逐步递增优化，而非直接使用高压条件。 |
低温运输，储存于-20℃，有效期1年，请勿反复冻融。
本品使用安全，未发现任何生物、化学毒性。如不慎沾染，用清水冲洗即可。
北京英格恩生物科技有限公司对EntransterTM-E基因转染试剂的每批产品实行严格质量检验，并进行转染验证，以确保产品质量。请用户使用前务必认真阅读操作手册。如用户仍然有问题，请立即联系本公司人员，英格恩公司将负责提供全程技术服务。
